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CRISPR-Cas9

Alt-R CRISPR-Cas9系統

Alt-R CRISPR-Cas9系統

Cas9核酸內切酶需要CRISPR RNA(crRNA)來指定靶序列,crRNA和反式激活crRNA(tracrRNA)結合先形成指引RNA(gRNA),隨后與核酸內切酶構成有編輯功能的核糖核蛋白復合物,即(Ribonucleoprotein complex,RNP).靶序列DNA切割后,通過非同源末端連接(Non-homologous end-joining,NHEJ)或同源重組(Homology directed recombination,HDR)修復從而產生序列變異。 Alt-R CRISPR-Cas9系列產品為基因編輯研究提供了簡單優化且使用方便的工具。

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CRISPR-Cas9 crRNA

CRISPR-Cas9 crRNA

Alt-R CRISPR-Cas9 系統將gRNA分成位點特異性的crRNA和序列通用型的tracrRNA兩部分,并對天然形式的crRNA和tracrRNA 序列進行優化,將天然形式的crRNA縮短至36個堿基,Alt-R tracrRNA縮短至67個堿基

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CRISPR-Cas9 tracrRNA

CRISPR-Cas9 tracrRNA

由于天然的tracrRNA較長(含有89個堿基),合成時不僅復雜而且費用高。因此IDT考慮將tracrRNA縮短,同時考察crRNA與tracerRNA在不同長度時的編輯效率。結果表明36個堿基crRNA與67個堿基tracrRNA組合時效率高。同時,67個堿基的tracrRNA與89個堿基相比成本更低,因此降低了客戶的使用成本。此外,還可以通過化學修飾使其具有核酸酶抗性。

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CRISPR-Cas9 sgRNA

CRISPR-Cas9 sgRNA

負責將Cas9蛋白質引導到基因組靶標位置到gRNA可以有多種形式,目前大范圍應用的形式是將sgRNA導入到質粒中或以雙鏈DNA為模版進行體外轉錄形成sgRNA。

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Cas9 Nuclease

Cas9 Nuclease

重組S. pyogenes?Cas9核酸酶,純化自大腸桿菌菌株。經密碼子優化,含有1個N端的NLS、2個C端的NLS和一個C端6-His標簽。

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Cas9 Nickase

Cas9 Nickase

重組S. pyogenes?Cas9切口酶,純化自大腸桿菌菌株。經密碼子優化,含有1個N端的NLS、2個C端的NLS和一個C端6-His標簽。 Alt-R?S.p. Cas9 D10A Nickase 3NLSc在DNA的靶向鏈上產生單鏈切割; Alt-R S.p. Cas9 H840A Nickase 3NLS 在非靶向鏈上產生單鏈切割。

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